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共聚焦熒光顯微鏡，求助有關(guān)熒光共聚焦顯微鏡的使用

來源：整理時(shí)間：2023-08-29 05:37:30 編輯：智能門戶手機(jī)版

本文目錄一覽

1，求助有關(guān)熒光共聚焦顯微鏡的使用
2，共聚焦顯微鏡的基本原理
3，激光共聚焦顯微鏡對(duì)載體表面熒光標(biāo)記蛋白質(zhì)能定量嗎
4，倒置熒光顯微鏡與激光共聚焦顯微鏡有什么區(qū)別
5，共焦熒光顯微鏡和多光子熒光顯微鏡的不同
6，共聚焦熒光顯微鏡觀察鈣黃綠素和四環(huán)素的激發(fā)波長和發(fā)射波長是多少

1，求助有關(guān)熒光共聚焦顯微鏡的使用

激光掃描共聚焦顯微鏡（Confocal laser scanning microscopeCLSM)近代先進(jìn)細(xì)胞物醫(yī)析儀器目前激光掃描共聚焦顯微技術(shù)已用于細(xì)胞形態(tài)定位、立體結(jié)構(gòu)重組、態(tài)變化程等研究并提供定量熒光測(cè)定、定量圖像析等實(shí)用研究手段結(jié)合其相關(guān)物技術(shù)形態(tài)、理、。

求助有關(guān)熒光共聚焦顯微鏡的使用

2，共聚焦顯微鏡的基本原理

傳統(tǒng)的光學(xué)顯微鏡使用的是場(chǎng)光源，標(biāo)本上每一點(diǎn)的圖像都會(huì)受到鄰近點(diǎn)的衍射或散射光的干擾；激光掃描共聚焦顯微鏡利用激光束經(jīng)照明針孔形成點(diǎn)光源對(duì)標(biāo)本內(nèi)焦平面的每一點(diǎn)掃描，標(biāo)本上的被照射點(diǎn)，在探測(cè)針孔處成像，由探測(cè)針孔后的光電倍增管（PMT）或冷電耦器件（cCCD）逐點(diǎn)或逐線接收，迅速在計(jì)算機(jī)監(jiān)視器屏幕上形成熒光圖像。照明針孔與探測(cè)針孔相對(duì)于物鏡焦平面是共軛的，焦平面上的點(diǎn)同時(shí)聚焦于照明針孔和發(fā)射針孔，焦平面以外的點(diǎn)不會(huì)在探測(cè)針孔處成像，這樣得到的共聚焦圖像是標(biāo)本的光學(xué)橫斷面，克服了普通顯微鏡圖像模糊的缺點(diǎn)。

共聚焦顯微鏡的基本原理

3，激光共聚焦顯微鏡對(duì)載體表面熒光標(biāo)記蛋白質(zhì)能定量嗎

坦白的講，以我對(duì)共聚焦熒光顯微鏡的了解，只能對(duì)熒光強(qiáng)度定性，不能定量。因?yàn)檎{(diào)焦是人為控制的，手動(dòng)調(diào)焦需要人的眼睛來判斷焦距是否調(diào)的很好，而這是不可能實(shí)現(xiàn)在相同條件下的熒光記錄和分析的，焦距的微小改變能夠很大程度上影響熒光強(qiáng)度的變化。所以，這并非造假，而是實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)本身的特點(diǎn)所決定的。文獻(xiàn)中的定量分析，個(gè)人認(rèn)為需要有折扣的相信。另外，熒光定量分析最準(zhǔn)確的方法是流式細(xì)胞儀分析。

a、利用熒光標(biāo)記特定的抗體，a錯(cuò)誤；b、可以將與染色體特異性結(jié)合的抗體用熒光標(biāo)記，來跟蹤染色體，進(jìn)而觀察活細(xì)胞有絲分裂過程中染色體的行為變化，b正確；c、只有動(dòng)物細(xì)胞能產(chǎn)生抗體，因此利用標(biāo)記的抗體不能研究植物的光合作用過程，c錯(cuò)誤；d、利用標(biāo)記的氨基酸分子可觀察分泌性蛋白的合成和分泌過程，d錯(cuò)誤．故選：b．

激光共聚焦顯微鏡對(duì)載體表面熒光標(biāo)記蛋白質(zhì)能定量嗎

4，倒置熒光顯微鏡與激光共聚焦顯微鏡有什么區(qū)別

熒光顯微鏡和激光共聚焦顯微鏡的區(qū)別激光共聚焦顯微鏡是采用激光作為光源，在傳統(tǒng)光學(xué)顯微鏡基礎(chǔ)上采用共軛聚焦原理和裝置，并利用計(jì)算機(jī)對(duì)所觀察的對(duì)象進(jìn)行數(shù)字圖象處理的一套觀察、分析和輸出系統(tǒng)。主要系統(tǒng)包括激光光源、自動(dòng)顯微鏡、掃描模塊（包括共聚焦光路通道和針孔、掃描鏡、檢測(cè)器）、數(shù)字信號(hào)處理器、計(jì)算機(jī)以及圖象輸出設(shè)備（顯示器、彩色打印機(jī)）等。通過激光掃描共聚焦顯微鏡，可以對(duì)觀察樣品進(jìn)行斷層掃描和成像。因此，可以無損傷的觀察和分析細(xì)胞的三維空間結(jié)構(gòu)。同時(shí)，通過激光掃描共聚焦顯微鏡也是活細(xì)胞的動(dòng)態(tài)觀察、多重免疫熒光標(biāo)記和離子熒光標(biāo)記觀察的有力工具.精確地對(duì)光譜的本質(zhì)進(jìn)行分析，區(qū)分發(fā)射光譜高度重疊的不同標(biāo)記的信號(hào)。最重要的是，對(duì)于多色的熒光染色，它能徹底消除了熒光串色的影響，同時(shí)最大限度的減少了樣品熒光信號(hào)的損失。這些都是一般光鏡所不能達(dá)到的。

5，共焦熒光顯微鏡和多光子熒光顯微鏡的不同

首先光源不同，一個(gè)是激光，一個(gè)是紫外或其他光照射產(chǎn)生的熒光。兩外，觀察方式不同，激光共聚焦是激光投射掃描；熒光是受激發(fā)產(chǎn)生的，光源可以在載物臺(tái)上方，也可以在載物臺(tái)下方。最后，制片方式也不同，激光共聚焦制片簡(jiǎn)單；熒光制片麻煩。----午禾科技

激光共聚焦顯微鏡是采用激光作為光源，在傳統(tǒng)光學(xué)顯微鏡基礎(chǔ)上采用共軛聚焦原理和裝置，并利用計(jì)算機(jī)對(duì)所觀察的對(duì)象進(jìn)行數(shù)字圖象處理的一套觀察、分析和輸出系統(tǒng)。主要系統(tǒng)包括激光光源、自動(dòng)顯微鏡、掃描模塊（包括共聚焦光路通道和針孔、掃描鏡、檢測(cè)器）、數(shù)字信號(hào)處理器、計(jì)算機(jī)以及圖象輸出設(shè)備（顯示器、彩色打印機(jī)）等。通過激光掃描共聚焦顯微鏡，可以對(duì)觀察樣品進(jìn)行斷層掃描和成像。因此，可以無損傷的觀察和分析細(xì)胞的三維空間結(jié)構(gòu)。同時(shí)，通過激光掃描共聚焦顯微鏡也是活細(xì)胞的動(dòng)態(tài)觀察、多重免疫熒光標(biāo)記和離子熒光標(biāo)記觀察的有力工具.精確地對(duì)光譜的本質(zhì)進(jìn)行分析，區(qū)分發(fā)射光譜高度重疊的不同標(biāo)記的信號(hào)。最重要的是，對(duì)于多色的熒光染色，它能徹底消除了熒光串色的影響，同時(shí)最大限度的減少了樣品熒光信號(hào)的損失。這些都是一般光鏡所不能達(dá)到的。

6，共聚焦熒光顯微鏡觀察鈣黃綠素和四環(huán)素的激發(fā)波長和發(fā)射波長是多少

兩者在工作原理及應(yīng)用方面存在不同。分述如下：一、熒光顯微鏡1、熒光顯微鏡是以紫外線為光源，用以照射被檢物體，使之發(fā)出熒光，然后在顯微鏡下觀察物體的形狀及其所在位置。熒光顯微鏡用于研究細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的吸收、運(yùn)輸、化學(xué)物質(zhì)的分布及定位等。細(xì)胞中有些物質(zhì)，如葉綠素等，受紫外線照射后可發(fā)熒光；另有一些物質(zhì)本身雖不能發(fā)熒光，但如果用熒光染料或熒光抗體染色后，經(jīng)紫外線照射亦可發(fā)熒光，熒光顯微鏡就是對(duì)這類物質(zhì)進(jìn)行定性和定量研究的工具之一。2、熒光顯微鏡原理：(A) 光源：光源輻射出各種波長的光(以紫外至紅外)。(B) 激勵(lì)濾光源：透過能使標(biāo)本產(chǎn)生螢光的特定波長的光，同時(shí)阻擋對(duì)激發(fā)螢光無用的光。(C) 熒光標(biāo)本：一般用熒光色素染色。(D) 阻擋濾光鏡：阻擋掉沒有被標(biāo)本吸收的激發(fā)光有選擇地透射熒光，在熒光中也有部分波長被選擇透過。　以紫外線為光源，使被照射的物體發(fā)出熒光的顯微鏡。電子顯微鏡是在1931年在德國柏林由克諾爾和哈羅斯卡首先裝配完成的。這種顯微鏡用高速電子束代替光束。由于電子流的波長比光波短得多，所以電子顯微鏡的放大倍數(shù)可達(dá)80萬倍，分辨的最小極限達(dá)0.2納米。1963年開始使用的掃描電子顯微鏡更可使人看到物體表面的微小結(jié)構(gòu)。3、應(yīng)用范圍：用來放大微小物體的圖像。一般應(yīng)用于對(duì)生物、醫(yī)藥、微觀粒子等觀測(cè)。二、共焦顯微鏡1、共焦顯微鏡在反射光的光路上加上了一塊半反半透鏡，將已經(jīng)通過透鏡的反射光折向其它方向，在其焦點(diǎn)上有一個(gè)帶有針孔的擋板，小孔就位于焦點(diǎn)處，擋板后面是一個(gè) 光電倍增管。可以想像，探測(cè)光焦點(diǎn)前后的反射光通過這一套共焦系統(tǒng)，必不能聚焦到小孔上，會(huì)被擋板擋住。于是光度計(jì)測(cè)量的就是焦點(diǎn)處的反射光強(qiáng)度。2、原理：傳統(tǒng)的光學(xué)顯微鏡使用的是場(chǎng)光源，標(biāo)本上每一點(diǎn)的圖像都會(huì)受到鄰近點(diǎn)的衍射或散射光的干擾；激光掃描共聚焦顯微鏡利用激光束經(jīng)照明針孔形成點(diǎn)光源對(duì)標(biāo)本內(nèi)焦平面的每一點(diǎn)掃描，標(biāo)本上的被照射點(diǎn)，在探測(cè)針孔處成像，由探測(cè)針孔后的光電倍增管（PMT）或冷電耦器件（cCCD）逐點(diǎn)或逐線接收，迅速在計(jì)算機(jī)監(jiān)視器屏幕上形成熒光圖像。照明針孔與探測(cè)針孔相對(duì)于物鏡焦平面是共軛的，焦平面上的點(diǎn)同時(shí)聚焦于照明針孔和發(fā)射針孔，焦平面以外的點(diǎn)不會(huì)在探測(cè)針孔處成像，這樣得到的共聚焦圖像是標(biāo)本的光學(xué)橫斷面，克服了普通顯微鏡圖像模糊的缺點(diǎn)。3、應(yīng)用領(lǐng)域：　涉及醫(yī)學(xué)、動(dòng)植物科研、生物化學(xué)、細(xì)菌學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、組織胚胎、食品科學(xué)、遺傳、藥理、生理、光學(xué)、病理、植物學(xué)、神經(jīng)科學(xué)、海洋生物學(xué)、材料學(xué)、電子科學(xué)、力學(xué)、石油地質(zhì)學(xué)、礦產(chǎn)學(xué)。

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