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本文目錄一覽

1，高效液相的原理是什么
2，求簡單介紹高效液相色譜
3，高效液相色譜法
4，高校液相色譜分離原理是什么
5，高效液相色譜儀器原理是什么
6，介紹高效液相色譜法入門知識(shí)

1，高效液相的原理是什么

利用液、固色譜原理，將組分用色譜柱事先分離，利用液、固分配原理，分離各組分，然后通過檢定器檢測，電腦記錄電信號(hào)，放大、計(jì)算，給出結(jié)果。

高效液相的原理是什么

2，求簡單介紹高效液相色譜

高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography \ HPLC）又稱“高壓液相色譜”、“高速液相色譜”、“高分離度液相色譜”、“近代柱色譜”等。高效液相色譜是色譜法的一個(gè)重要分支，以液體為流動(dòng)相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動(dòng)相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進(jìn)入檢測器進(jìn)行檢測，從而實(shí)現(xiàn)對試樣的分析。該方法已成為化學(xué)、醫(yī)學(xué)、工業(yè)、農(nóng)學(xué)、商檢和法檢等學(xué)科領(lǐng)域中重要的分離分析技術(shù).簡單地說，就是一種采用高壓噴注，或是打成氣溶膠然后進(jìn)行物質(zhì)分離和分析的一種方法，

求簡單介紹高效液相色譜

3，高效液相色譜法

鹽析原理 :一些物質(zhì)比如蛋白質(zhì)在水溶液中的溶解度是由蛋白質(zhì)周圍親水基團(tuán)與水形成水化膜的程度，以及蛋白質(zhì)分子帶有電荷的情況決定的。當(dāng)用中性鹽加入蛋白質(zhì)溶液，中性鹽對水分子的親和力大于蛋白質(zhì)，于是蛋白質(zhì)分子周圍的水化膜層減弱乃至消失。同時(shí)，中性鹽加入蛋白質(zhì)溶液后，由于離子強(qiáng)度發(fā)生改變，蛋白質(zhì)表面電荷大量被中和，更加導(dǎo)致蛋白溶解度降低，使蛋白質(zhì)分子之間聚集而沉淀。鹽析 1.鹽析一般是指溶液中加入無機(jī)鹽類而使溶解的物質(zhì)析出的過程。如：加濃（NH4）2SO4使蛋白質(zhì)凝聚的過程。 2.向某些蛋白質(zhì)溶液中加入某些無機(jī)鹽溶液后,可以使蛋白質(zhì)凝聚而從溶液中析出,這種作用叫作鹽析。 3.把動(dòng)物脂肪或植物油與氫氧化鈉按一定比例放在皂化鍋內(nèi)攪拌加熱，反應(yīng)后形成的高級(jí)脂肪酸鈉、甘油、水形成混合物。往鍋內(nèi)加入食鹽顆粒，攪拌、靜置，使高級(jí)脂肪酸鈉與甘油、水分離，浮在液面。（該反應(yīng)用以制肥皂）

高效液相色譜法

4，高校液相色譜分離原理是什么

分離原理是根據(jù)被分離的組分在流動(dòng)相和固定相中溶解度不同而分離，分離過程是一個(gè)分配平衡過程。高效液相色譜主要有4種，下面分別描述一下。1、液-固吸附色譜。固定相是固體吸附劑，它是根據(jù)物質(zhì)在固定相是吸附作用差異來分離的。吸附作用越強(qiáng)，K值越大保留時(shí)間越長。2、液-液分配色譜。顧名思義，它是將固定液涂在擔(dān)體上作為固定相的，它的分離原理與液液萃取的原理相同，從而服從分配定律。在固定液中溶解度大，K值大，保留時(shí)間長3、離子交換色譜。是離子交換樹脂上可電離的離子與具有相同電荷的被測離子可逆交換，由于被測離子在不同交換劑上具有不同的親和力而使子分離，親和力越強(qiáng)，K值越大保留時(shí)間越長。4、排阻色譜。固定相是多孔凝膠，內(nèi)布孔隙，分子大于孔隙的不能進(jìn)入固定相，直接從表面流過，幾乎沒有保留，小分子的物質(zhì)可自由進(jìn)出孔隙完全不受排阻，保留時(shí)間長。中等體積的分子介于兩種情況之間。分離順序只與分子的尺寸有關(guān)。對于反相色譜，極性越小的物質(zhì)，流動(dòng)相的極性越大，保留時(shí)間越長。極性越小的物質(zhì)，流動(dòng)相的極性越小，保留時(shí)間越短。對于極性大的物質(zhì)來說，流動(dòng)相的極性對其保留時(shí)間影響較小，而正相色譜正好相反。高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography \ HPLC）又稱“高壓液相色譜”、“高速液相色譜”、“高分離度液相色譜”、“近代柱色譜”等。高效液相色譜是色譜法的一個(gè)重要分支，以液體為流動(dòng)相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動(dòng)相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進(jìn)入檢測器進(jìn)行檢測，從而實(shí)現(xiàn)對試樣的分析。該方法已成為化學(xué)、醫(yī)學(xué)、工業(yè)、農(nóng)學(xué)、商檢和法檢等學(xué)科領(lǐng)域中重要的分離分析技術(shù)應(yīng)用。

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5，高效液相色譜儀器原理是什么

高效液相色譜儀主要的組成部件為高壓輸液泵、進(jìn)樣裝置、色譜柱、檢測器和色譜數(shù)據(jù)處理裝置。1.高壓輸液泵由于高效液相色譜所使用的色譜柱一般裝填小于10μm的固定相顆粒，故對流動(dòng)相有較大的阻力，所以對于泵的耐壓有一定的要求。除此之外，對于輸液泵還有泵體材料耐化學(xué)腐蝕、輸出流量范圍寬、輸出流量穩(wěn)定等要求。高壓輸液泵可以分為恒壓泵和恒流泵兩大類。恒壓泵是指輸出恒定壓力的泵，當(dāng)系統(tǒng)阻力不變時(shí)可以保持恒定流量，但系統(tǒng)阻力發(fā)生變化時(shí)，就會(huì)影響到系統(tǒng)流量穩(wěn)定，因此現(xiàn)在基本已不使用。恒流泵是指可輸出恒定體積流量的泵，又分為注射型泵和往復(fù)式柱塞泵兩類。注射型泵由于其工作過程中需停流吸液以及價(jià)格昂貴等原因，目前基本不用于高效液相色譜儀中。往復(fù)式柱塞泵則可以提供低脈動(dòng)的連續(xù)穩(wěn)定液流，廣泛應(yīng)用于各種商品化儀器中，并衍生出了雙柱塞往復(fù)式并聯(lián)泵、雙柱塞往復(fù)式串聯(lián)泵、雙柱塞獨(dú)立驅(qū)動(dòng)的往復(fù)式串聯(lián)泵等多種設(shè)計(jì)。2.進(jìn)樣裝置在HPLC分析中由于使用了高效顆粒填料和高壓的流動(dòng)相，因而對樣品的進(jìn)樣方式要求提高，需要使樣品在進(jìn)入色譜柱頭時(shí)準(zhǔn)確地注人其上端填料的中心，形成集中的一點(diǎn)，以保證擴(kuò)散效應(yīng)影響降到最低。為實(shí)現(xiàn)以上要求有兩種設(shè)計(jì)：停流進(jìn)樣和六通閥進(jìn)樣，但現(xiàn)在停流進(jìn)樣技術(shù)已經(jīng)完全被簡單易用的六通閥進(jìn)樣方式所取代。3.色譜柱色譜柱一般使用內(nèi)壁拋光的直型不銹鋼管作為柱管以獲得高柱效。當(dāng)使用粗內(nèi)徑短柱和細(xì)內(nèi)徑色潛柱時(shí)，需要注意柱外效應(yīng)所引起的色譜峰展寬，應(yīng)該盡量縮短進(jìn)樣器至檢測器之間的連接管路，以獲得更小的柱外死體積。HPLC色譜柱裝填的固定相，其基體材料多為全多孔球形或無定形的硅膠顆粒，在高壓下使用勻漿裝柱法裝填，并在色譜柱兩端使用多孔不銹鋼燒結(jié)材料的過濾片以阻擋流動(dòng)相中的微小機(jī)械雜質(zhì)進(jìn)入，并防止固定相流失。4.檢測器檢測器主要用于檢測經(jīng)色譜柱分離后的組分濃度變化。常用的檢測器為紫外/可見光檢測器、熒光檢測器、示差折光檢測器、蒸發(fā)光散射檢測器等。5.色譜數(shù)據(jù)處理裝置高效液相色譜的分析結(jié)果數(shù)據(jù)現(xiàn)已廣泛使用色譜數(shù)據(jù)工作站來記錄和處理。色譜工作站基于微型計(jì)算機(jī)的硬件，可以實(shí)現(xiàn)如下功能：(1) 儀器操作參數(shù)的控制功能——色譜儀的所有可控參數(shù)，均可預(yù)先設(shè)定并保存記錄，在運(yùn)行樣品時(shí)自動(dòng)調(diào)用并傳輸至儀器。(2) 數(shù)據(jù)采集和處理功能——可通過計(jì)算機(jī)和儀器之間的數(shù)據(jù)傳輸接口自動(dòng)采集色譜數(shù)據(jù)。并根據(jù)指定處理參數(shù)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，提供色譜圖的相關(guān)積分?jǐn)?shù)據(jù)，還可以選擇不同的標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算方式來對樣品自動(dòng)進(jìn)行計(jì)算，得到定性或定量的結(jié)果。還具有計(jì)算柱效、繪制工作曲線等其他功能。

6，介紹高效液相色譜法入門知識(shí)

樓主，您好。高效液相色譜法系采用高壓輸液泵將規(guī)定的流動(dòng)相泵入裝有填充劑的色譜柱進(jìn)行分離測定的色譜方法。注入進(jìn)樣閥的供試品，由流動(dòng)相帶入柱內(nèi)，各成分在柱內(nèi)被分離，并依次進(jìn)入檢測器，由記錄儀、積分儀或數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)記錄色譜信號(hào)。采用微柱液相色譜系統(tǒng)可以減少溶劑的消耗并達(dá)到快速分離之目的。高效液相色譜法的主要分離機(jī)制有吸附、分配、離子交換和排阻作用。 1．對儀器的一般要求所用的儀器為高效液相色譜儀。儀器應(yīng)定期檢定并符合有關(guān)規(guī)定。（1）色譜柱最常用的色譜柱填充劑為化學(xué)鍵合硅膠。反相色譜系統(tǒng)使用非極性填充劑，以十八烷基硅烷鍵合硅膠最為常用，辛基硅烷鍵合硅膠和其他類型的硅烷鍵合硅膠（如氰基硅烷鍵合相和氨基硅烷鍵合相等）也有使用。正相色譜系統(tǒng)使用極性填充劑，常用的填充劑有硅膠等。離子交換填充劑用于離子交換色譜；凝膠或高分子微球等填充劑用于分子排阻色譜等；手性鍵合填充劑用于對映異構(gòu)體的拆分分析。填充劑的性能（如載體的形狀、粒徑、孔徑、表面積、鍵合基團(tuán)的表面覆蓋度、含碳量和鍵合類型等因素）以及色譜柱的填充，將直接影響待測物的保留行為和分離效果?？讖皆?50？以下的填料適合于分析分子量小于2000的化合物，分子量大于2000的化合物則應(yīng)選擇孔徑在300？以上的填料。以硅膠為載體的鍵合固定相填充劑適用pH2～8的流動(dòng)相。當(dāng)pH大于8時(shí)，可使載體硅膠溶解；當(dāng)pH小于2時(shí)，與硅膠相連的化學(xué)鍵合相易水解脫落。當(dāng)色譜系統(tǒng)中需使用pH大于8的流動(dòng)相時(shí)，應(yīng)選用耐堿的填充劑，如采用高純硅膠為載體并具有高表面覆蓋度的鍵合硅膠、包覆聚合物填充劑、有機(jī)-無機(jī)雜化填充劑或非硅膠填充劑等；當(dāng)需使用pH小于2的流動(dòng)相時(shí)，應(yīng)選用耐酸的填充劑，如具有大體積側(cè)鏈能產(chǎn)生空間位阻保護(hù)作用的二異丙基或二異丁基取代十八烷基硅烷鍵合硅膠、有機(jī)-無機(jī)雜化填充劑等。（2）檢測器最常用的檢測器為紫外吸收檢測器，其他常見的檢測器有二極管陣列檢測器（DAD）、熒光檢測器、示差折光檢測器、蒸發(fā)光散射檢測器、電化學(xué)檢測器和質(zhì)譜檢測器等。紫外、二極管陣列、熒光、電化學(xué)檢測器為選擇性檢測器，其響應(yīng)值不僅與待測物的質(zhì)量有關(guān)，還與化合物的結(jié)構(gòu)有關(guān)；示差折光檢測器和蒸發(fā)光散射檢測器為通用型檢測器，對所有的化合物結(jié)構(gòu)均有響應(yīng)；蒸發(fā)光散射檢測器屬質(zhì)量型檢測器，對結(jié)構(gòu)類似的化合物，其響應(yīng)值幾乎僅與待測物的質(zhì)量有關(guān)；二極管陣列檢測器可以同時(shí)記錄待測物在規(guī)定波長范圍內(nèi)的吸收光譜，故可用于待測物的光譜管制和色譜峰純度的檢查。紫外、熒光、電化學(xué)和示差折光檢測器的響應(yīng)值與待測物的質(zhì)量呈線性關(guān)系，但蒸發(fā)光散射檢測器響應(yīng)值與待測物的質(zhì)量通常并不呈線性關(guān)系，必要時(shí)需對響應(yīng)值進(jìn)行數(shù)學(xué)轉(zhuǎn)換后進(jìn)行計(jì)算。不同的檢測器，對流動(dòng)相的要求不同。當(dāng)采用紫外檢測器時(shí)，所用流動(dòng)相應(yīng)至少符合紫外分光光度法（附錄ⅣA）項(xiàng)下對溶劑的要求；采用低波長檢測時(shí)，還應(yīng)考慮有機(jī)相中有機(jī)溶劑的截止使用波長，并選用色譜級(jí)有機(jī)溶劑。蒸發(fā)光散射檢測器和質(zhì)譜檢測器通常不允許使用含不揮發(fā)鹽組分的流動(dòng)相。（3）流動(dòng)相由于C18鏈在水相環(huán)境中不易保持伸展?fàn)顟B(tài)，故對于十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相的反相色譜系統(tǒng)，流動(dòng)相中有機(jī)溶劑的比例通常不應(yīng)低于5％，否則C18鏈的隨機(jī)卷曲將導(dǎo)致組分保留值變化，造成色譜系統(tǒng)不穩(wěn)定。正文中各品種項(xiàng)下規(guī)定的條件除固定相種類、流動(dòng)相組成、檢測器類型不得任意改變外，其余如色譜柱內(nèi)徑、長度、固定相牌號(hào)、載體粒度、流動(dòng)相流速、混合流動(dòng)相各組成的比例、柱溫、進(jìn)樣量、檢測器的靈敏度等，均可適當(dāng)改變，以適應(yīng)具體的色譜系統(tǒng)并達(dá)到系統(tǒng)適用性試驗(yàn)的要求。但對某些品種，必須用特定牌號(hào)的填充劑方能滿足分離要求，可在該品種項(xiàng)下注明。 2．系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜中最難分離物質(zhì)對或與其相關(guān)的物質(zhì)對的分離度和待測物響應(yīng)值的重復(fù)性是系統(tǒng)適用性試驗(yàn)的重要參數(shù)。按各品種項(xiàng)下要求對色譜系統(tǒng)進(jìn)行適用性試驗(yàn)，即用規(guī)定的對照品對色譜系統(tǒng)進(jìn)行試驗(yàn)和調(diào)整，應(yīng)符合要求；或規(guī)定色譜條件下的最小理論板數(shù)、分離度、重復(fù)性和拖尾因子。（1）色譜柱的理論板數(shù)（n）在規(guī)定的色譜的條件下，注入供試品溶液或各品種項(xiàng)下規(guī)定的內(nèi)標(biāo)物質(zhì)溶液，記錄色譜圖，量出供試品主成分或內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰的保留時(shí)間tR（以分鐘或長度計(jì)，下同，但應(yīng)取相同單位）和半高峰寬（Wh/2），按n＝5.54（tR/Wh/2）2計(jì)算色譜柱的理論板數(shù)，如果測得理論板數(shù)低于各品種項(xiàng)下規(guī)定的最小理論板數(shù)，應(yīng)改變色譜柱的某些條件（如柱長、載體性能、色譜柱充填的效果等），使理論板數(shù)符合要求。（2）分離度定量分析時(shí)，為便于準(zhǔn)確測量，要求定量峰與其他峰或內(nèi)標(biāo)峰之間有較好的分離度。分離度（R）的計(jì)算公式為：式中tR2為相鄰兩峰中后一峰的保留時(shí)間； tR1為相鄰兩峰中前一峰的保留時(shí)間； W1及W2為此相鄰兩峰的峰寬。除另有規(guī)定外，分離度應(yīng)大于1.5。（3）重復(fù)性取各品種項(xiàng)下的對照溶液，連續(xù)進(jìn)樣3～5次，除另有規(guī)定外，其峰面積測量值的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于2.0%。也可按各品種校正因子測定項(xiàng)下，配制相當(dāng)于80%、100%和120%的對照品溶液，加入規(guī)定量的內(nèi)標(biāo)溶液，配成3種不同濃度的溶液，分別進(jìn)樣3次，計(jì)算平均校正因子。其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差也應(yīng)不大于2.0%。（4）拖尾因子為保證測量精度，應(yīng)檢查待測峰的拖尾因子（T）是否符合各品種項(xiàng)下的規(guī)定，或不同濃度進(jìn)樣的校正因子誤差是否符合要求。拖尾因子計(jì)算公式為：式中W0.05h為0.05峰高處的峰寬； d1為峰極大至峰前沿之間的距離。除另有規(guī)定外，峰高法定量時(shí)T應(yīng)在0.95～1.05之間。 3．測定法定量測定時(shí)，可根據(jù)供試品的具體情況采用峰面積法或峰高法。但測定雜質(zhì)含量時(shí)，須采用峰面積法。（1）內(nèi)標(biāo)法加校正因子測定供試品中某個(gè)雜質(zhì)或主成分含量按各品種項(xiàng)下的規(guī)定，精密稱（量）取對照品和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)，分別配成溶液，精密量取各溶液，配成校正因子測定用的對照溶液。取一定量注入儀器，記錄色譜圖。測量對照品和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積或峰高，按下式計(jì)算校正因子：校正因子式中AS為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積或峰高； AR為對照品的峰面積或峰高； CS為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的濃度； CR為對照品的濃度。再取各品種項(xiàng)下含有內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的供試品溶液，注入儀器，記錄色譜圖，測量供試品（或其雜質(zhì)）峰和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積或峰高，按下式計(jì)算含量：含量式中AX為供試品（或其雜質(zhì)）峰面積或峰高； CX為供試品（或其雜質(zhì)）的濃度； A′S為供試品溶液中內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積或峰高； C′S為供試品溶液中內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的濃度； f為校正因子。當(dāng)配制校正因子測定用的對照溶液和含有內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的供試品溶液使用同一份內(nèi)標(biāo)物質(zhì)溶液時(shí)，CS=C′S，則配制內(nèi)標(biāo)物質(zhì)溶液不必精密稱（量）取。（2）外標(biāo)法測定供試品中某個(gè)雜質(zhì)或主成分含量按各品種項(xiàng)下的規(guī)定，精密稱（量）取對照品和供試品，配制成溶液，分別精密取一定量，注入儀器，記錄色譜圖，測量對照品和供試品待測成分的峰面積（或峰高），按下式計(jì)算含量：含量式中各符號(hào)意義同上。由于微量注射器不易精確控制進(jìn)樣量，當(dāng)采用外標(biāo)法測定供試品中某雜質(zhì)或主成分含量時(shí)，以定量環(huán)或自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣為好。（3）加校正因子的主成分自身對照法測定雜質(zhì)含量時(shí)，可采用加校正因子的主成分自身對照法。在建立方法時(shí)，按各品種項(xiàng)下的規(guī)定，精密稱（量）取雜質(zhì)對照品和待測成分對照品各適量，配制測定雜質(zhì)校正因子的溶液，進(jìn)樣，記錄色譜圖，按上述（1）法計(jì)算雜質(zhì)的校正因子。此校正因子可直接載入各品種正文中，用于校正雜質(zhì)的實(shí)測面積。這些需作校正計(jì)算的雜質(zhì)，通常以主成分為參照采用相對保留時(shí)間定位，其數(shù)值一并載入各品種正文中。測定雜質(zhì)含量時(shí)，按各品種項(xiàng)下規(guī)定的雜質(zhì)限度，將供試品稀釋成與雜質(zhì)限度相當(dāng)?shù)娜芤鹤鳛閷φ杖芤?，進(jìn)樣，調(diào)節(jié)檢測靈敏度（以噪聲水平可接受為限）或進(jìn)樣量（以柱子不過載為限），使對照溶液中的主成分色譜峰高約達(dá)滿量程的10%～25%或其峰面積能準(zhǔn)確積分（通常含量低于0.5%的雜質(zhì)，峰面積的RSD應(yīng)小于10%；含量在0.5%～2%的雜質(zhì)，峰面積的RSD應(yīng)小于5%；含量大于2%的雜質(zhì)，峰面積的RSD應(yīng)小于2%）。然后，取供試品溶液和對照品溶液適量，分別進(jìn)樣，供試品溶液的記錄時(shí)間，除另有規(guī)定外，應(yīng)為主成分保留時(shí)間的2倍，測量供試品溶液色譜圖上各雜質(zhì)的峰面積，分別乘以相應(yīng)的校正因子后與對照溶液主成分的峰面積比較，依法計(jì)算各雜質(zhì)含量。詳情請參考國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)網(wǎng) www.rmhot.com （4）不加校正因子的主成分自身對照法當(dāng)沒有雜質(zhì)對照品時(shí)，可采用不加校正因子的主成分自身對照法。同上述（3）法配制對照溶液并調(diào)節(jié)檢測靈敏度后，取供試品溶液和對照溶液適量，分別進(jìn)樣，前者的記錄時(shí)間，除另有規(guī)定外，應(yīng)為主成分保留時(shí)間的2倍，測量供試品溶液色譜圖上各雜質(zhì)的峰面積并與對照溶液主成分的峰面積比較，計(jì)算雜質(zhì)含量。若供試品所含的部分雜質(zhì)未與溶劑峰完全分離，則按規(guī)定先記錄供試品溶液的色譜圖Ⅰ，再記錄等體積純?nèi)軇┑纳V圖Ⅱ。色譜圖Ⅰ上雜質(zhì)峰的總面積（包括溶劑峰），減去色譜圖Ⅱ上的溶劑峰面積，即為總雜質(zhì)峰的校正面積。然后依法計(jì)算。（5）面積歸一化法由于峰面積歸一化法測定誤差大，因此，本法通常只能用于粗略考察供試品中的雜質(zhì)含量。除另有規(guī)定外，一般不宜用于微量雜質(zhì)的檢查。方法是測量個(gè)雜質(zhì)峰的面積和色譜圖上除溶劑峰以外的總色譜峰面積，計(jì)算各雜質(zhì)峰面積及其之和占總峰面積的百分率。求采納