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共焦顯微鏡,共聚焦顯微鏡的基本原理

來源:整理 時間:2025-02-14 11:46:22 編輯:智能門戶 手機版

本文目錄一覽

1,共聚焦顯微鏡的基本原理

傳統(tǒng)的光學顯微鏡使用的是場光源,標本上每一點的圖像都會受到鄰近點的衍射或散射光的干擾;激光掃描共聚焦顯微鏡利用激光束經(jīng)照明針孔形成點光源對標本內(nèi)焦平面的每一點掃描,標本上的被照射點,在探測針孔處成像,由探測針孔后的光電倍增管(PMT)或冷電耦器件(cCCD)逐點或逐線接收,迅速在計算機監(jiān)視器屏幕上形成熒光圖像。照明針孔與探測針孔相對于物鏡焦平面是共軛的,焦平面上的點同時聚焦于照明針孔和發(fā)射針孔,焦平面以外的點不會在探測針孔處成像,這樣得到的共聚焦圖像是標本的光學橫斷面,克服了普通顯微鏡圖像模糊的缺點。

共聚焦顯微鏡的基本原理

2,與單光子共焦顯微鏡相比雙光子共焦顯微鏡有何優(yōu)點

雙光子共焦顯微鏡具有許多突出的優(yōu)點:1. 雙光子共焦顯微鏡可以采用波長比較長的、在生物組織中穿透能力比較強的紅外激光作為激發(fā)光源,因此可以解決生物組織中深層物質(zhì)的層析成像問題。2. 由于雙光子熒光波長距離發(fā)光波長,因此雙光子共焦顯微鏡可以實現(xiàn)暗場成像。3. 雙光子可以避免普通成像中的熒光漂白問題和生物細胞的光致毒問題 。4. 雙光子躍遷具有很強的激發(fā)選擇性,有利于對生物組織中一些特殊物質(zhì)進行成像研究。
首先光源不同,一個是激光,一個是紫外或其他光照射產(chǎn)生的熒光。兩外,觀察方式不同,激光共聚焦是激光投射掃描;熒光是受激發(fā)產(chǎn)生的,光源可以在載物臺上方,也可以在載物臺下方。最后,制片方式也不同,激光共聚焦制片簡單;熒光制片麻煩。----午禾科技

與單光子共焦顯微鏡相比雙光子共焦顯微鏡有何優(yōu)點

3,激光掃描共焦顯微鏡定義

工作原理 激光掃描顯微鏡是建立在光學顯微鏡及各種掃描顯微鏡基礎上的一種新型的掃描成象系統(tǒng)。利用聚焦的激光束在樣品表面掃描,同時利用光電檢測器件接收樣品反射光(或透射光),樣品結(jié)構的變化使反射光(或透射光)強度改變,因而使光電檢測器的輸出電流改變,經(jīng)信號處理,同步顯示在計算機屏幕上。由于照射在樣品的是聚焦的激光束,具有很小的直徑,因此沒有來自鄰近區(qū)域的散射光的影響,從而可以提高信噪比,即增強了對比度。同時由于激光掃描顯微鏡是直接接收反射光(或透射光),因此檢測靈敏度高,且檢測系統(tǒng)比較簡單。 本儀器采用共焦方法,還可以在光束能透入的范圍內(nèi)實現(xiàn)深度剖面的分層成象,因此成為研究薄膜材料、集成電路及生物組織乃至細胞等的微細結(jié)構及其深度剖面的非常有效的工具。對半導體器件,由于光電效應,可通過適當負載直接接收光電流,將光電信號通過成象處理,即可得到光電成象。

激光掃描共焦顯微鏡定義

4,激光掃描共聚焦顯微鏡的激光共聚焦顯微鏡原理

在普通寬視野光學顯微鏡中,整個標本全部都被水銀弧光燈或氙燈的光線照明,圖像可以用肉眼直接觀察 。 同時,來自焦點以外的其他區(qū)域的熒光對結(jié)構的干擾較大,尤其是標本的厚度在 2um 以上時,其影響更為明顯。激光共聚焦顯微鏡脫離了傳統(tǒng)光學顯微鏡的場光源和局部平面成像模式,采用激光束作光源,激光束經(jīng)照明針孔,經(jīng)由分光鏡反射至物鏡,并聚焦于樣品上,對標本焦平面上每一點進行掃描。 組織樣品中如果有可被激發(fā)的熒光物質(zhì),受到激發(fā)后發(fā)出的熒光經(jīng)原來入射光路直接反向回到分光鏡,通過探測針孔時先聚焦,聚焦后的光被光電倍增管(PMT)探測收集,并將信號輸送到計算機,處理后在計算機顯示器上顯示圖像 。 在這個光路中,只有在焦平面的光才能穿過探測針孔,焦平面以外區(qū)域射來的光線在探測小孔平面是離焦的,不能通過小孔。因此,非觀察點的背景呈黑色,反差增加,成像清晰。由于照明針孔與探測針孔相對于物鏡焦平面是共軛的,焦平面上的點同時聚焦于照明針孔與探測針孔,焦平面以外的點不會在探測針孔處成像,即共聚焦[7]。 以激光作光源并對樣品進行掃描,在此過程中兩次聚焦,故稱為激光掃描共聚焦顯微鏡。

5,共焦激光掃描顯微鏡

1.工作原理 激光掃描顯微鏡是建立在光學顯微鏡及各種掃描顯微鏡基礎上的一種新型的掃描成象系統(tǒng)。利用聚焦的激光束在樣品表面掃描,同時利用光電檢測器件接收樣品反射光(或透射光),樣品結(jié)構的變化使反射光(或透射光)強度改變,因而使光電檢測器的輸出電流改變,經(jīng)信號處理,同步顯示在計算機屏幕上。由于照射在樣品的是聚焦的激光束,具有很小的直徑,因此沒有來自鄰近區(qū)域的散射光的影響,從而可以提高信噪比,即增強了對比度。同時由于激光掃描顯微鏡是直接接收反射光(或透射光),因此檢測靈敏度高,且檢測系統(tǒng)比較簡單。 本儀器采用共焦方法,還可以在光束能透入的范圍內(nèi)實現(xiàn)深度剖面的分層成象,因此成為研究薄膜材料、集成電路及生物組織乃至細胞等的微細結(jié)構及其深度剖面的非常有效的工具。對半導體器件,由于光電效應,可通過適當負載直接接收光電流,將光電信號通過成象處理,即可得到光電成象。
國家生物醫(yī)學分析中心電鏡實驗室有:激光掃描共聚焦顯微鏡 bio-rad radiance2100、 <a target="_blank">http://www.ncba.cn/dj/dj_ins.asp</a>設備主要指標: <a target="_blank">http://www.ncba.cn/dj/conf.asp</a>

6,共聚焦顯微鏡 微分干涉顯微鏡 哪個更好

沒什么好不好的,各有各的特點,看你具體實驗的要求微分干涉顯微鏡可以看活細胞共聚焦顯微鏡可以做熒光這是主要的區(qū)別
1952年,nomarski在相差顯微鏡原理的基礎上發(fā)明了微分干涉差顯微鏡(differential interference contrast microscope)。dic顯微鏡又稱nomarski相差顯微鏡(nomarki contrast microscope),其優(yōu)點是能顯示結(jié)構的三維立體投影影像。與相差顯微鏡相比,其標本可略厚一點,折射率差別更大,故影像的立體感更強。 dic顯微鏡的物理原理完全不同于相差顯微鏡,技術設計要復雜得多。dic利用的是偏振光,有四個特殊的光學組件:偏振器(polarizer)、dic棱鏡、dic滑行器和檢偏器(analyzer)。偏振器直接裝在聚光系統(tǒng)的前面,使光線發(fā)生線性偏振。在聚光器中則安裝了石英wollaston棱鏡,即dic棱鏡,此棱鏡可將一束光分解成偏振方向不同的兩束光(x和y),二者成一小夾角。聚光器將兩束光調(diào)整成與顯微鏡光軸平行的方向。最初兩束光相位一致,在穿過標本相鄰的區(qū)域后,由于標本的厚度和折射率不同,引起了兩束光發(fā)生了光程差。在物鏡的后焦面處安裝了第二個wollaston棱鏡,即dic滑行器,它把兩束光波合并成一束。這時兩束光的偏振面(x和y)仍然存在。最后光束穿過第二個偏振裝置,即檢偏器。在光束形成目鏡dic影像之前,檢偏器與偏光器的方向成直角。檢偏器將兩束垂直的光波組合成具有相同偏振面的兩束光,從而使二者發(fā)生干涉。x和y波的光程差決定著透光的多少。光程差值為0時,沒有光穿過檢偏器;光程差值等于波長一半時,穿過的光達到最大值。于是在灰色的背景上,標本結(jié)構呈現(xiàn)出亮暗差。為了使影像的反差達到最佳狀態(tài),可通過調(diào)節(jié)dic滑行器的縱行微調(diào)來改變光程差,光程差可改變影像的亮度。調(diào)節(jié)dic滑行器可使標本的細微結(jié)構呈現(xiàn)出正或負的投影形象,通常是一側(cè)亮,而另一側(cè)暗,這便造成了標本的人為三維立體感,類似大理石上的浮雕。 dic顯微鏡使細胞的結(jié)構,特別是一些較大的細胞器,如核、線粒體等,立體感特別強,適合于顯微操作。目前像基因注入、核移植、轉(zhuǎn)基因等的顯微操作常在這種顯微鏡下進行。differential interference contrast microscopy (dic), also known as nomarski interference contrast (nic) or nomarski microscopy, is an optical microscopy illumination technique used to enhance the contrast in unstained, transparent samples. dic works on the principle of interferometry to gain information about the optical density of the sample, to see otherwise invisible features. a relatively complex lighting scheme produces an image with the object appearing black to white on a grey background. this image is similar to that obtained by phase contrast microscopy but without the bright diffraction halo.dic works by separating a polarised light source into two beams which take slightly different paths through the sample. where the length of each optical path (i.e. the product of refractive index and geometric path length) differs, the beams interfere when they are recombined. this gives the appearance of a three-dimensional physical relief corresponding to the variation of optical density of the sample, emphasising lines and edges though not providing a topographically accurate image.
這個不是哪個好或不好的問題,要根據(jù)你的實驗要求來定,共聚焦基本上都是進口的,微分干涉顯微鏡國內(nèi)也在做,而且也可以標到100倍物鏡,有需要的話可以和上海測維光電技術有限公司聯(lián)系!
文章TAG:焦顯顯微鏡共聚共聚焦顯微鏡共焦顯微鏡

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