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熒光分析法，分子熒光光譜分析的介紹

來源：整理 時間：2024-12-22 21:53:09 編輯：智能門戶 手機版

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1，分子熒光光譜分析的介紹

利用某些物質(zhì)分子受光照射時所發(fā)生的熒光的特性和強度，進行物質(zhì)的定性分析或定量分析的方法。

分子熒光光譜分析的介紹

2，為何熒光分析法的靈敏度比紫外可見分光光度法的靈敏度高

紫外-可見分光度法比較， 熒光分析法具有更高的靈敏度。 熒光強度與激發(fā)光強度成 ... 維生素B2 在pH＝6～7 時熒光最強， ... 中經(jīng)光線照射， 會發(fā)生分解而轉(zhuǎn)化為光黃素， 后者的熒光比核黃素的熒光強的多。 ...
這是由于熒光分析法是在入射光直角方向測定熒光強度，即在黑背景下檢測，因此可以通過增加入射光強度來提高靈敏度，而紫外 可見測定參數(shù)是A，該值與入射光強度和透射光比值有關(guān)，入射光增大，透射光也增大，增大檢測器的放大倍數(shù)，也影響入射光和透射光的檢測，因此限制了靈敏度

為何熒光分析法的靈敏度比紫外可見分光光度法的靈敏度高

3，簡要敘述原子熒光光譜分析法原理及方法的主要特點

原子熒光光譜法（AFS）是用一定的激光光源（連續(xù)光源或者線光源）發(fā)射具有特征信號的光，照射含有一定濃度的待測元素的原子蒸氣后，其中的自由原子被激發(fā)躍遷到較高能級，然后去激發(fā)躍遷到某一較低能級（長春市基態(tài)）或去激發(fā)躍遷到不同于原來能級的另一較低能級而發(fā)射出各種特征原子熒光光譜，由此可以辨別元素的存在，并根據(jù)測量的熒光強度求出待測樣品中元素的含量。 該式為原子熒光分析的基本關(guān)系式。 上述說明，在一定的條件下，熒光強度I(f)與基態(tài)原子數(shù)N0成正比，也就是I(f)與待測原子濃度成正比。 K在一定條件下是常數(shù)，c為待測原子濃度。 原子熒光光譜法的主要特點為： 靈敏度較高熒光譜線比較簡單，因此光譜干擾小

簡要敘述原子熒光光譜分析法原理及方法的主要特點

4，熒光分析法的特點

熒光分析是一種先進的分析方法，它比電子探針法、質(zhì)譜法、光譜法、極譜法等都應(yīng)用的較廣泛和普及，這同熒光分析具有很多優(yōu)點分不開的。熒光分析所用的設(shè)備較簡單，如目測熒光儀和熒光光度計構(gòu)造非常簡單完全可以自己制造。比起質(zhì)譜儀、極譜儀和電子探針儀來它在造價上要便宜很多倍，而且熒光分析的最大特點是：分析靈敏度高、選擇性強和使用簡便。同時具備這三大特點的儀器并不多 。 在紫外線照射下能直接發(fā)射熒光的化學(xué)元素并不很多，所以對一些元素進行熒光分析時大部分采用間接測定法，這就是用有機試劑與被測定的元素組成絡(luò)合物。這些絡(luò)合物在紫外線照射下能發(fā)射出不同波長的熒光素，然后由熒光強度測定出該元素的含量。由于有機熒光試劑的品種繁多，用熒光分析可測定的元素有六十多種 。例如對鉛的熒光分析：鉛離子Pb與Cl離子組成鉛氯絡(luò)合物，該絡(luò)合物在短波紫外光270毫微米激發(fā)下，它會發(fā)射出藍(lán)色熒光，熒光峰值波長在480毫微米，根據(jù)熒光強度在標(biāo)準(zhǔn)工作曲線上測定出Pb的含量。該法能測定0.1~0.6微克鉛/毫升。

5，為什么熒光分析法的靈敏度比紫外可見分光光度法高

因為熒光分析法屬于發(fā)光分析 只有待測物分子可以發(fā)出指定波長的熒光 紫外-可見分光光度法是吸光光度法 除待測物之外 其它物質(zhì)也可能對入射光產(chǎn)生吸收 和波長沒有關(guān)系我剛讀研 做的就是熒光分析
因為熒光或磷光分析法是在入射光的直角方向測定熒光強度,即在黑背景下進行檢測,因此可以通過入射光強度i或者增大熒光或者磷光信號的放大倍數(shù)來提高靈敏度,而紫外-可見法中測定的參數(shù)是吸光度,該值與入射光強度和透射光強度的比值相關(guān),入射強度增大,透射光強度也隨之增大,增大檢測器的放大倍數(shù)也同時影響入射光和透射光的檢測,因而限制了靈敏度的提高望采納
這是由于熒光分析法是在入射光直角方向測定熒光強度，即在黑背景下檢測，因此可以通過增加入射光強度來提高靈敏度，而紫外可見測定參數(shù)是A，該值與入射光強度和透射光比值有關(guān)，入射光增大，透射光也增大，增大檢測器的放大倍數(shù)，也影響入射光和透射光的檢測，因此限制了靈敏度
因為·入射光強的原因 在紫外-可見分光光度法中入射光強 吸收光強就增加 而熒光分析法中入射光強增加 不會影響吸收光強 所以A增加 靈敏度提高 第二是儀器結(jié)構(gòu)不同紫外-可見分光光度法中是平行的 而熒光分析法是垂直的
據(jù)說是，紫外是由于電子從基態(tài)躍遷到激發(fā)態(tài)，是從穩(wěn)態(tài)到不穩(wěn)態(tài)，所以比較困難，靈敏度低；而熒光則是由激發(fā)態(tài)返回基態(tài)，從不穩(wěn)態(tài)到穩(wěn)態(tài)，大勢所趨呀，所以容易測，即靈敏度高。按理說同一物質(zhì)其紫外吸收波長和熒光發(fā)射波長應(yīng)該是一致的，如果儀器好的話。 又，在另一本書上說，與紫外比，熒光是從與入射光垂直方向檢測，即在黑背景下檢測熒光的發(fā)射，所以一般熒光分析的靈敏度比紫外高2~4個數(shù)量級。

6，熒光分析法是以什么定律為基礎(chǔ)的

答：熒光分光光度計是以朗伯比爾定律為基礎(chǔ)進行定性定量分析的儀器.使用熒光分光光度計,主要用于熒光定量分析法,定量的基礎(chǔ)依據(jù)是朗伯比爾定律.
時間分辨熒光分析法（time resolved fluoroisnmunoassay,trfia）是近十年發(fā)展起來的一測微量分析方法，是目前最靈敏的微量分析技術(shù),其靈敏度高達10-19，較放射免疫分析（ria）高出3個數(shù)量級。 　　時間分辨熒光分析法（trfia）實際上是在熒光分析（fia）的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的，它是一種特殊的熒光分析。熒光分析的利用了熒光的波長與其激發(fā)波長的巨大差異克服了普通紫外－可見分光分析法中雜色光的影響，同時，熒光分析與普通分光不同，光電接受器與激發(fā)光不在同一直線上，激發(fā)光不能直接到達光電接受器，從而大幅度的提高了光學(xué)分析的靈敏度。但是，當(dāng)進行超微量分析的時候，激發(fā)光的雜散光的影響就顯得嚴(yán)重了。因此，解決激發(fā)光的雜散光的影響成了提高靈敏度的瓶頸。 　　解決雜散光影響的最好方法當(dāng)然是測量時沒有激發(fā)光的存在。但普通的熒光標(biāo)志物熒光壽命非常短，激發(fā)光消失，熒光也消失。不過有非常少的稀土金屬（eu、tb、sm、dy)的熒光壽命較長，可達1－2ms，能夠滿足測量要求，因此而產(chǎn)生了時間分辨熒光分析法，即使用長效熒光標(biāo)記物，在關(guān)閉激發(fā)光后再測定熒光強度的分析方法。 　　平時常用的稀土金屬主要是eu(銪）和tb(鋱），eu熒光壽命1ms,在水中不穩(wěn)定，但加入增強劑后可以克服；tb熒光壽命1.6ms，水中穩(wěn)定，但其熒光波長短、散射嚴(yán)重、能量大易使組分分解，因此從測量方法學(xué)上看tb很好，但不適合用于生物分析，故eu最為常用。 　　由于常用eu作為熒光標(biāo)記，因此增強劑就成了試劑中的重要組成。增強劑原理：利用含絡(luò)合劑、表面活性劑的溶液的親水和親脂性同時存在，使eu在水中處于穩(wěn)定狀態(tài)?，F(xiàn)在有些試劑，在絡(luò)合eu在抗體上時已考慮了增強問題，而使用了具有增強作用的新絡(luò)合劑，因而有的試劑沒有單獨的增強劑。 　　隨著檢驗醫(yī)學(xué)的發(fā)展，對微量、超微量的測定會越來越多，同時ria的污染問題會越來越被重視，因此，時間分辨熒光分析法（trfia）具有越來越大的應(yīng)用空間。
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