懸浮培養(yǎng)，植物細胞懸浮培養(yǎng)的影響因素有哪些

來源：整理時間：2025-03-15 19:29:06 編輯：智能門戶手機版

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1，植物細胞懸浮培養(yǎng)的影響因素有哪些
2，什么是微載體懸浮培養(yǎng)
3，哪些類型的細胞可用于懸浮培養(yǎng)
4，植物懸浮細胞能不能夠在靜止?fàn)顟B(tài)下進行培養(yǎng)
5，什么是懸浮培養(yǎng)
6，細胞懸浮培養(yǎng)技術(shù)

1，植物細胞懸浮培養(yǎng)的影響因素有哪些

溫度，PH，無菌環(huán)境，光照，植物激素的比例營養(yǎng)物質(zhì)濃度等等

藥用植物次生代謝產(chǎn)物的五種生產(chǎn)途徑。1、直接從植物中提取次生代謝產(chǎn)物；2、化學(xué)合成模擬；3、微生物(細菌或真菌)發(fā)酵；4、利用植物組織和細胞培養(yǎng)法生產(chǎn)次生代謝產(chǎn)物；5、利用基因工程生產(chǎn)次生代謝產(chǎn)物。

植物細胞懸浮培養(yǎng)的影響因素有哪些

2，什么是微載體懸浮培養(yǎng)

在流動的液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)非貼壁的懸浮細胞或小細胞團的細胞或組織的培養(yǎng)方法。細胞附著在微運載體上的培養(yǎng)也是一種懸浮培養(yǎng)。非貼壁依賴性細胞的一種培養(yǎng)方式。細胞懸浮于培養(yǎng)基中生長或維持。某些貼壁依賴性細胞經(jīng)過適應(yīng)和選擇也可用此方法培養(yǎng)。增加懸浮培養(yǎng)規(guī)模相對比較簡單，只要增加體積就可以子。深度超過5mm，需要攪動培養(yǎng)基，超過10cm，還需要深層通入CO2和空氣，以保證足夠的氣體交換。通過振蕩或轉(zhuǎn)動裝置使細胞始終處于分散懸浮于培養(yǎng)液內(nèi)的培養(yǎng)方法。

百度一個貼吧里有關(guān)于微載體的介紹，很詳細，你可以看一看。鏈接：http://tieba.baidu.com/f?kz=812463636

什么是微載體懸浮培養(yǎng)

3，哪些類型的細胞可用于懸浮培養(yǎng)

高等動物細胞懸浮培養(yǎng)主要是免疫系統(tǒng)的細胞,因為這些細胞不需要細胞間和細胞與培養(yǎng)表面的接觸.常見的有Jurkat（人的T細胞）,J774 （鼠單核細胞）等等.當(dāng)然從人或者動物身上提取出來的免疫細胞也可以懸浮培養(yǎng),不過養(yǎng)這些需要刺激,而且養(yǎng)不長.細菌細胞也可以懸浮培養(yǎng),如E.coli

骨髓的細胞，白血病細胞等是可以懸浮培養(yǎng)的。做好懸浮細胞培養(yǎng)藥注意以下幾點：1. 避免污染,在超凈臺內(nèi)操作,操作前半小時先進行紫外殺菌.2. 所有用品高溫滅菌,或者進行70%酒精擦洗.3. 培養(yǎng)過程中,每隔一段時間取出一部分細胞冷凍保存,以防污染后沒有細胞可以用.

高等動物細胞懸浮培養(yǎng)主要是免疫系統(tǒng)的細胞，因為這些細胞不需要細胞間和細胞與培養(yǎng)表面的接觸。常見的有Jurkat（人的T細胞）， J774 （鼠單核細胞）等等。當(dāng)然從人或者動物身上提取出來的免疫細胞也可以懸浮培養(yǎng)，不過養(yǎng)這些需要刺激，而且養(yǎng)不長。細菌細胞也可以懸浮培養(yǎng)，如E.coli

哪些類型的細胞可用于懸浮培養(yǎng)

4，植物懸浮細胞能不能夠在靜止?fàn)顟B(tài)下進行培養(yǎng)

植物懸浮細胞能不能夠在靜止?fàn)顟B(tài)下進行培養(yǎng)實驗原理:植物細胞的懸浮培養(yǎng)是指將植物細胞或較小的細胞團懸浮在液體培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，在培養(yǎng)過程中能夠保持良好的分散狀態(tài)。植物離體培養(yǎng)可產(chǎn)生愈傷組織。將疏松型的愈傷組織縣浮在液體培養(yǎng)基中并在振蕩條件下培養(yǎng)一段時間后，可形成分散縣浮培養(yǎng)物。良好的縣浮培養(yǎng)物應(yīng)具備以下特征：（1）主要有單細胞和小細胞團組成；（2）細胞具有量盛的生長和分裂能力，增殖速度快；（3）大多數(shù)細胞在形態(tài)上應(yīng)具有分生細胞的特征，它們多呈等徑形，核一質(zhì)比率大，胞質(zhì)濃厚，無液胞化程度較低。在液體懸浮培養(yǎng)過程中應(yīng)注意及時進行細胞繼代培養(yǎng)，因為當(dāng)培養(yǎng)物生長到一定時期將進入分裂的靜止期。對于多數(shù)懸浮培養(yǎng)物來說，細胞在培養(yǎng)到第18～25d 時達到最大的密度，此時應(yīng)進行第一次繼代培養(yǎng)。在繼代培養(yǎng)時，應(yīng)將較大的細胞團塊和接種物殘渣除去。若從植物器官或組織開始建立細胞懸浮培養(yǎng)體系，就包括愈傷組織的誘導(dǎo)、繼代培養(yǎng)、單細胞分離和懸浮培養(yǎng)。目前這項技術(shù)已經(jīng)廣泛應(yīng)用于細胞的形態(tài)、生理、遺傳、凋亡等研究工作，特別是為基因工程在植物細胞水平上的操作提供了理想的材料和途徑。經(jīng)過轉(zhuǎn)化的植物細胞再經(jīng)過誘導(dǎo)分化形成植株，即可獲得攜帶有目標(biāo)基因的個體。主要試劑:B5培養(yǎng)基加上0.2mg NAA（naphthalene acetic acid）的液體培養(yǎng)基（取3.2g B5粉末培養(yǎng)基，蔗糖30g，200ul體積質(zhì)量為1mg/ml的NAA貯備液，溶于約800ml蒸餾水中，置于磁力攪拌器上混合均勻，pH計測定pH 值，1mol/l KOH調(diào)節(jié)pH值至5.8，加蒸餾水定容至1L，鋁箔紙封口后121℃滅菌20min，貯于4℃冰箱，接種前水浴或自然升至室溫）。

不能,一方面植物細胞代謝活動需要氧氣，一般需要攪拌暢耽扳甘殖仿幫濕爆濺增加溶解氧。另一方面，植物細胞培養(yǎng)一般為的是取得細胞代謝產(chǎn)物或次級代謝產(chǎn)物，靜止?fàn)顟B(tài)下進行培養(yǎng)不利于這些產(chǎn)物的排出。此外靜止?fàn)顟B(tài)下容易形成細胞團。

5，什么是懸浮培養(yǎng)

非貼壁依賴性細胞的一種培養(yǎng)方式。細胞懸浮于培養(yǎng)基中生長或維持。某些貼壁依賴性細胞經(jīng)過適應(yīng)和選擇也可用此方法培養(yǎng)。增加懸浮培養(yǎng)規(guī)模相對比較簡單，只要增加體積就可以子。深度超過5mm，需要攪動培養(yǎng)基，超過10cm，還需要深層通入CO2和空氣，以保證足夠的氣體交換。通過振蕩或轉(zhuǎn)動裝置使細胞始終處于分散懸浮于培養(yǎng)液內(nèi)的培養(yǎng)方法。利用固體瓊脂培養(yǎng)基對植物的離體組織進行培養(yǎng)的方法在植物遺傳實驗中已經(jīng)得到廣泛的應(yīng)用。但這種方法在某些方面還存在一些缺點，比如在培養(yǎng)過程中，植物的愈傷組織在生長過程中的營養(yǎng)成分、植物組織產(chǎn)生的代謝物質(zhì)呈現(xiàn)一個梯度分布，而且瓊脂本身也有一些不明的物質(zhì)成分可能對培養(yǎng)物產(chǎn)生影響，從而導(dǎo)致植物組織生長發(fā)育過程中代謝的改變而利用液體培養(yǎng)基則可以克服這一缺點，當(dāng)植物的組織在液體培養(yǎng)基中生長時，我們可以通過薄層震蕩培養(yǎng)或向培養(yǎng)基中通氣用以改善培養(yǎng)基中氧氣的供應(yīng)。植物細胞的懸浮培養(yǎng)是指將植物細胞或較小的細胞團懸浮在液體培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，在培養(yǎng)過程中能夠保持良好的分散狀態(tài)。這些小的細胞聚合體通常來自植物的愈傷組織。一般的操作過程是把未分化的愈傷組織轉(zhuǎn)移到液體培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)。在培養(yǎng)過程中不斷進行旋轉(zhuǎn)震蕩，一般可用100～120 r/min 的速度進行。由于液體培養(yǎng)基的旋轉(zhuǎn)和震蕩，使得愈傷組織上分裂的細胞不斷游離下來。在液體培養(yǎng)基中的培養(yǎng)物是混雜的，既有游離的單個細胞，也有較大的細胞團塊，還有接種物的死細胞殘渣。在液體懸浮培養(yǎng)過程中應(yīng)注意及時進行細胞繼代培養(yǎng)，因為當(dāng)培養(yǎng)物生長到一定時期將進入分裂的靜止期。對于多數(shù)懸浮培養(yǎng)物來說，細胞在培養(yǎng)到第18～25d 時達到最大的密度，此時應(yīng)進行第一次繼代培養(yǎng)。在繼代培養(yǎng)時，應(yīng)將較大的細胞團塊和接種物殘渣除去。若從植物器官或組織開始建立細胞懸浮培養(yǎng)體系，就包括愈傷組織的誘導(dǎo)、繼代培養(yǎng)、單細胞分離和懸浮培養(yǎng)。目前這項技術(shù)已經(jīng)廣泛應(yīng)用于細胞的形態(tài)、生理、遺傳、凋亡等研究工作，特別是為基因工程在植物細胞水平上的操作提供了理想的材料和途徑。經(jīng)過轉(zhuǎn)化的植物細胞再經(jīng)過誘導(dǎo)分化形成植株，即可獲得攜帶有目標(biāo)基因的個體。

6，細胞懸浮培養(yǎng)技術(shù)

植物細胞懸浮培養(yǎng) 實驗方法1.用鑷子夾取出生長旺盛的松軟愈傷組織，放入三角瓶中并輕輕夾碎。每100ml三角瓶含滅過菌MS培養(yǎng)基10~15ml，每瓶接種1~1.5g愈傷組織，以保證最初培養(yǎng)物中有足夠量的細胞。2.將已接種的三角置于旋轉(zhuǎn)式搖床上。在100r/min，25~28℃條件下，進行振蕩培養(yǎng)。3.經(jīng)6~10天培養(yǎng)后，若細胞明顯增殖，可向培養(yǎng)瓶中加新鮮培養(yǎng)基10ml，必要時，可用大口移液管將培養(yǎng)物分裝成兩瓶，繼續(xù)培養(yǎng)。（若細胞無明顯增殖，可能是起始材料不適當(dāng)，應(yīng)考慮用旺盛增殖期的愈傷組織重新接種）。可進行第一次繼代培養(yǎng)。4.縣浮培養(yǎng)物的過濾：按“3”法繼代培養(yǎng)幾代后，培養(yǎng)液中應(yīng)主要由單細胞和小細胞團（不多于20個細胞）組成。若仍含有效大的細胞團，可用適當(dāng)孔徑的金屬網(wǎng)篩過濾，再將過濾后的縣浮細胞繼續(xù)培養(yǎng)。5.細胞計算。取一定體積的細胞縣液，加入2倍體積的8%的三氧化鉻（CrO3），置700C水浴處理15min。冷卻后，用移液管重復(fù)吹打細胞懸液，以使細胞充分分散，混勻后，取一滴縣液置入血細胞計數(shù)板上計數(shù)。6.制作細胞生長曲線：為了解縣浮培養(yǎng)細胞的生長動態(tài)，可用以下方法繪制生長曲線圖：（1）鮮重法（fresh weigh method）在轉(zhuǎn)代培養(yǎng)的不同時間，取一定體積的懸浮細胞培養(yǎng)物，離心收集后，稱量細胞的鮮重，以鮮重為縱座標(biāo)，培養(yǎng)時間為橫座標(biāo)，繪制鮮重增長曲線。（2）干重法（dry weigh method ）可在稱量鮮重之后，將細胞進行曲烘干，再稱量干重。以干重為縱坐標(biāo)，培養(yǎng)時間為橫坐標(biāo)，繪制細胞干重生長曲線。上述兩種方法均需每隔2天取樣一次，共取7次，每個樣品重復(fù)三次，整個實驗進行期間不再往培養(yǎng)瓶中換入新鮮培養(yǎng)液。7.細胞活力的檢查。對于初學(xué)者，往往需要檢測活細胞的比率?？稍谂囵B(yǎng)的不同階段，吸取一滴細胞縣液，放在載玻片上，滴一滴0。1%的酚藏花紅溶液（用培養(yǎng)基配制）染色，在顯微鏡下觀察。幾活細胞均不著色，而死細胞則很快被染成紅色。也可用0。1%熒光雙醋酸酯溶液染色，凡活細胞將在紫外光誘發(fā)下顯示藍絕色熒光，有經(jīng)驗的操作者，則可根據(jù)細胞形態(tài)，胞質(zhì)環(huán)流判別細胞的死活。8.細胞再生能力的鑒定：為了解懸浮培養(yǎng)細胞是否仍具有再生能力，可將培養(yǎng)細胞轉(zhuǎn)移到瓊脂固化的培養(yǎng)基上，使基再形成愈傷組織，進而在分化培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)植株的分化。

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懸浮培養(yǎng)，植物細胞懸浮培養(yǎng)的影響因素有哪些

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2，什么是微載體懸浮培養(yǎng)

3，哪些類型的細胞可用于懸浮培養(yǎng)

4，植物懸浮細胞能不能夠在靜止?fàn)顟B(tài)下進行培養(yǎng)

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6，細胞懸浮培養(yǎng)技術(shù)

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