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實(shí)時(shí)熒光定量，普通RTPCR與實(shí)時(shí)熒光定量PCR的引物有什么區(qū)別

來(lái)源：整理時(shí)間：2025-03-20 20:35:45 編輯：智能門(mén)戶(hù) 手機(jī)版

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1，普通RTPCR與實(shí)時(shí)熒光定量PCR的引物有什么區(qū)別
2，實(shí)時(shí)熒光定量PCR和定量PCR有什么區(qū)別
3，實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)原理是什么
4，什么是實(shí)時(shí)熒光定量PCR有什么作用請(qǐng)用自己的話(huà)詳細(xì)說(shuō)明搜
5，realtime RTPCR是什么意思
6，什么是實(shí)時(shí)熒光定量PCR有什么應(yīng)用領(lǐng)域與傳統(tǒng)PCR有什么區(qū)別

1，普通RTPCR與實(shí)時(shí)熒光定量PCR的引物有什么區(qū)別

實(shí)時(shí)定量的引物設(shè)計(jì)要求比較高,可以按普通引物設(shè)計(jì)的方法來(lái)做,但是設(shè)計(jì)時(shí)要注意擴(kuò)增的片段不能太大,最好在250bp-100bp之間.同時(shí)要保證這對(duì)引物有絕對(duì)的特異性,因?yàn)橐钱a(chǎn)生非特異性擴(kuò)增的話(huà),就不能準(zhǔn)確的計(jì)量模板量了,這樣就失去了實(shí)時(shí)定量的意義了

普通RTPCR與實(shí)時(shí)熒光定量PCR的引物有什么區(qū)別

2，實(shí)時(shí)熒光定量PCR和定量PCR有什么區(qū)別

實(shí)時(shí)熒光定量PCR和定量PCR有什么區(qū)別實(shí)時(shí)熒光是反應(yīng)熒光數(shù)值定量，普通那種是通過(guò)條帶半定量，現(xiàn)在做半定量的已經(jīng)很少了，除非是一些驗(yàn)證試驗(yàn)必須要圖的

完全兩個(gè)不同的概念，梯度pcr是指你的pcr儀在設(shè)置的時(shí)候可以同一時(shí)間不同位置設(shè)置一個(gè)從高到低的溫度梯度，以便在不知道退火溫度的情況下選擇一個(gè)最適宜的退火溫度。二實(shí)時(shí)熒光定量pcr是通過(guò)再pcr過(guò)程中摻入熒光染料或釋放熒光基團(tuán)，從而對(duì)模板進(jìn)行相對(duì)定量或絕對(duì)定量的實(shí)驗(yàn)，在實(shí)時(shí)熒光定量pcr時(shí)也可以設(shè)置梯度，總的來(lái)說(shuō)實(shí)時(shí)熒光定量pcr是一種實(shí)驗(yàn)方法，而梯度pcr是一種實(shí)驗(yàn)手段

實(shí)時(shí)熒光定量PCR和定量PCR有什么區(qū)別

3，實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)原理是什么

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) ( PCR) 可對(duì)特定核苷酸片斷進(jìn)行指數(shù)級(jí)的擴(kuò)增。在擴(kuò)增反應(yīng)結(jié)束之后，我們可以通過(guò)凝膠電泳的方法對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行定性的分析，也可以通過(guò) 放射性核素?fù)饺霕?biāo)記后的光密度掃描來(lái)進(jìn)行定量的分析。無(wú)論定性還是定量分析，分析的都是 PCR 終產(chǎn)物。但是在許多情況下，我們所感興趣的是未經(jīng) PCR 信號(hào)放大之前的起始模板量。例如我們想知道某一轉(zhuǎn)基因動(dòng)植物轉(zhuǎn)基因的拷貝數(shù)或者某一特定基因在特定組織中的表達(dá)量。在這種需求下熒光定量 PCR 技術(shù)應(yīng)運(yùn)而生。所謂的實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 就是通過(guò)對(duì) PCR 擴(kuò)增反應(yīng)中每一個(gè)循環(huán)產(chǎn)物熒光信號(hào)的實(shí)時(shí)檢測(cè)從而實(shí)現(xiàn)對(duì)起始模板定量及定性的分析。在實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 反應(yīng)中，引入了一種熒光化學(xué)物質(zhì)，隨著 PCR 反應(yīng)的進(jìn)行， PCR 反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì)，熒光信號(hào)強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過(guò)一個(gè)循環(huán)，收集一個(gè)熒光強(qiáng)度信號(hào)，這樣我們就可以通過(guò)熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測(cè)產(chǎn)物量的變化，從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線(xiàn)圖。生物幫上面有相關(guān)知識(shí)， http://www.bio1000.com/zt/cell/201378.html 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng), 植物細(xì)胞培養(yǎng), ES細(xì)胞（胚胎干細(xì)胞）培養(yǎng), 細(xì)胞懸浮培養(yǎng), 貼壁細(xì)胞培養(yǎng)。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)原理是什么

4，什么是實(shí)時(shí)熒光定量PCR有什么作用請(qǐng)用自己的話(huà)詳細(xì)說(shuō)明搜

熒光定量PCR是將熒光素結(jié)合到PCR的反應(yīng)物上,然后隨著反應(yīng)的進(jìn)行檢測(cè)熒光的強(qiáng)度可以實(shí)時(shí)的檢測(cè)產(chǎn)物的量.

pcr的全稱(chēng)是：多聚酶鏈反應(yīng)，用俗話(huà)說(shuō)就是人為地制造一個(gè)環(huán)境，使雙鏈基因片段進(jìn)行復(fù)制、擴(kuò)增目的基因：就是你想要擴(kuò)增的基因片段變性：是在熱的環(huán)境下使雙鏈解鏈，一般需要94攝氏度引物：引導(dǎo)復(fù)制的開(kāi)始，是一種rna單鏈片段，能引導(dǎo)復(fù)制的起始位置聚合酶：用的是taq酶是在火山口找到的一種耐熱的酶，在它的作用下以四種脫氧核苷酸（dntp）為原料合成雙鏈延伸：通俗點(diǎn)說(shuō)就是原來(lái)的模板鏈和新合成的單鏈組成一條新的雙鏈的過(guò)程，延伸時(shí)間的長(zhǎng)短、溫度的高低會(huì)影響新雙鏈的質(zhì)量 pcr的大致過(guò)程 1、模板dna 2、（第一輪循環(huán)）：模板dna變性和引物復(fù)性 3、（第一輪循環(huán)）：引物延伸 4、（第二輪循環(huán)）：新合成的雙鏈變性和引物復(fù)性 5、（第二輪循環(huán)）：引物延伸 …… 如此往復(fù)，直至結(jié)束之后可以泡個(gè)瓊脂糖電泳看看擴(kuò)增的情況，也可以測(cè)od值，計(jì)算濃度現(xiàn)在也有real time pcr，實(shí)時(shí)定量pcr，可以在間隔相等的時(shí)間測(cè)反應(yīng)物的濃度，獲得相對(duì)較準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)，比較簡(jiǎn)便。總的來(lái)說(shuō)，做分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)就是一項(xiàng)燒錢(qián)的活

5，realtime RTPCR是什么意思

real-time RT-PCR實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR雙語(yǔ)對(duì)照詞典結(jié)果：網(wǎng)絡(luò)釋義1. 熒光定量RT-PCR2. 實(shí)時(shí)定量RT-PCR3. 熒光RT-PCR

外文名【Real-time Quantitative polymerase chain reaction】中文名【實(shí)時(shí)熒光定量多聚核苷酸鏈?zhǔn)椒磻?yīng)】中文簡(jiǎn)稱(chēng) 【實(shí)時(shí)熒光定量PCR】外文簡(jiǎn)稱(chēng) 【RT PCR】【實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)】，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，最后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR （Quantitative Real-time PCR）是一種在DNA擴(kuò)增反應(yīng)中，以熒光化學(xué)物質(zhì)測(cè)每次聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）循環(huán)后產(chǎn)物總量的方法。通過(guò)內(nèi)參或者外參法對(duì)待測(cè)樣品中的特定DNA序列進(jìn)行定量分析的方法?！eal-timePCR是在PCR擴(kuò)增過(guò)程中，通過(guò)熒光信號(hào)，對(duì)PCR進(jìn)程進(jìn)行實(shí)時(shí)檢測(cè)。由于在PCR擴(kuò)增的指數(shù)時(shí)期，模板的Ct值和該模板的起始拷貝數(shù)存在線(xiàn)性關(guān)系，所以成為定量的依據(jù)。【技術(shù)原理】將標(biāo)記有熒光素的Taqman探針與模板DNA混合后，完成高溫變性，低溫復(fù)性，適溫延伸的熱循環(huán)，并遵守聚合酶鏈反應(yīng)規(guī)律，與模板DNA互補(bǔ)配對(duì)的Taqman探針被切斷，熒光素游離于反應(yīng)體系中，在特定光激發(fā)下發(fā)出熒光，隨著循環(huán)次數(shù)的增加，被擴(kuò)增的目的基因片段呈指數(shù)規(guī)律增長(zhǎng)，通過(guò)實(shí)時(shí)檢測(cè)與之對(duì)應(yīng)的隨擴(kuò)增而變化熒光信號(hào)強(qiáng)度，求得Ct值，同時(shí)利用數(shù)個(gè)已知模板濃度的標(biāo)準(zhǔn)品作對(duì)照，即可得出待測(cè)標(biāo)本目的基因的拷貝數(shù)。

6，什么是實(shí)時(shí)熒光定量PCR有什么應(yīng)用領(lǐng)域與傳統(tǒng)PCR有什么區(qū)別

．熒光共振能量傳遞 (FRET)某熒光標(biāo)記基團(tuán)在激發(fā)光刺激下生成某波長(zhǎng)的發(fā)射光，當(dāng)另一屏蔽基團(tuán)與其距離合適時(shí)，原發(fā)射光將會(huì)被屏蔽基團(tuán)所吸收，并轉(zhuǎn)化為其他波長(zhǎng)的發(fā)射光或熱能，稱(chēng)之為FRET。2．熒光化學(xué)：熒光定量PCR所使用的熒光化學(xué)可分為兩種：熒光探針和熒光染料。PCR擴(kuò)增時(shí)在加入一對(duì)引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收；PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5－3外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物形成完全同步。二．實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)靶基因的確定及引物和探針的設(shè)計(jì)原則1．靶基因的確定：選擇檢測(cè)組共有的基因以避免檢測(cè)的假陰性(漏檢)。2．檢測(cè)片段的確定：選擇檢測(cè)組內(nèi)的保守 (突變少)（避免假陰性）、組間特異的序列 (突變多)（避免假陽(yáng)性）作為引物探針的設(shè)計(jì)位置。片段長(zhǎng)度70-150bp。3．引物：長(zhǎng)度17-25bp;GC含量30-80%;退火溫度(Tm值)58-60℃；避免穩(wěn)定的引物二聚體（特別是多聯(lián)檢測(cè)）及發(fā)夾結(jié)構(gòu)(自由能大于-3.5kc/m)；序列不能出現(xiàn)連續(xù)的G，3端避免G或C，最后5個(gè)堿基內(nèi)避免兩個(gè)以上的G或C。4．探針：長(zhǎng)度20-30bp（Taqman)或16-25bp(MGB)；GC含量30-80%；Tm值為68-70℃；避免穩(wěn)定的二聚體及發(fā)夾結(jié)構(gòu) (自由能大于-3.5kc/m)；5端不能是G；位置盡量靠近上游引物；選擇波長(zhǎng)差異較大（多聯(lián)檢測(cè)）或Fam(單聯(lián)檢測(cè)）的熒光標(biāo)記。三.特點(diǎn)和優(yōu)勢(shì)1．特異性強(qiáng)：引物和探針的“雙保險(xiǎn)”，避免檢測(cè)的假陽(yáng)性。2．靈敏度高：分析PCR產(chǎn)物的對(duì)數(shù)期，自動(dòng)化儀器收集熒光信號(hào)，避免了許多人為因素干擾。3．避免污染：全封閉反應(yīng)，無(wú)須PCR后處理。4．實(shí)現(xiàn)定量：運(yùn)用標(biāo)準(zhǔn)品獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，結(jié)合Ct值進(jìn)行準(zhǔn)確定量。5．高效低耗：可實(shí)現(xiàn)一管多檢。6．操作簡(jiǎn)便：在線(xiàn)式實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)擴(kuò)增結(jié)果，不必接觸有害物質(zhì)。7．快速：反應(yīng)時(shí)間<1.5小時(shí)。四．實(shí)用意義：1．提高檢測(cè)效率，縮短檢測(cè)周期，提高通關(guān)速度；2．降低檢測(cè)成本，提高經(jīng)濟(jì)與社會(huì)效益。

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